Extração e observação da molécula de DNA
BIOLOGIA
EXTRAÇÃO E OBSERVAÇÃO DA MOLÉCULA DE DNA
Objetivo
Extrair o DNA da banana que pode ser visualiza a olho nu.
Observar a estrutura do DNA no microscópio.
Descrição
As membranas, celular e nuclear são compostas principalmente por lipídios. As proteínas encontram-se aprisionadas na bicamada lipídica.Os organitos celulares são compostos por proteínas, ácidos nucléicos ( DNA e RNA ), envolvidos por uma membrana.As paredes celulares das células vegetais são compostas essencialmente por polissacarídeos.As pequenas estruturas celulares são compostas por substâncias com diferentes propriedades químicas, pelo que os procedimentos experimentais devem ser definidos de modo a separar um determinado constituinte celular das restantes partes, sem causar muitos danos.
Material
Saco plástico (tipo zip loc);
Morango ou banana ou kiwi;
Tubos de ensaio;
Bastão de vidro ou palito de madeira;
Álcool etílico gelado;
Béquer ou copo de vidro;
Conta-gotas;
Lâmina e lamínula;
Microscópio;
Aparato filtrante (gases ou papel de filtro);
Funil;
Aproximadamente 10ml de solução extratora de DNA;
Água (de preferência mineral);
Observação:
Receita da solução extratora de DNA:
50mL de detergente líquido;
2 colheres de chá de sal (NaCl);
900mL de água.
Misture tudo em um recipiente (béquer ou copo).
Procedimento
1. Coloque a fruta, previamente lavada em saco plástico zip loc e esmague-a com o punho (cuidado para não rasgar o saco) até ficar um extrato homogêneo;
2. Adicione a solução extratora ao conteúdo do saco, misture tudo apertando com as mãos homogeneizando;
3. Derrame o extrato no filtro com o aparato filtrante e deixe filtrar num recipiente (béquer ou copo);
4. Encha a menos da metade, um tubo de ensaio com o filtrado;
5. Derrame devagar o álcool gelado do tubo de ensaio (deixando-o escorrer vagarosamente pela borda) a fim de se formar duas fases, a superior, alcoólica e a inferior, a aquosa. O volume adicionado do álcool deve ser aproximadamente o mesmo volume do filtrado;
6. Mergulhe o bastão ou palito dentro do tubo até o local onde se encontra a solução mais turva (o filtrado com moléculas de DNA);
7. Retire um pouco dos filamentos e coloque-os em uma lâmina, pingue uma gota da solução extratora, cubra com uma lamínula e em seguida observe ao microscópio.
8. Desenhe em forma de esquema o observado.
Análise
O detergente dissolve as membranas lipídicas além de desintegrar os núcleos e os cromossomos das células da cebola, liberando o DNA. Com a ruptura das membranas, o conteúdo celular, incluindo DNA e proteínas, se soltam e se dispersam na solução. Um dos componentes do detergente, o lalril sulfato de sódio, desnatura as proteínas, separando-as do DNA cromossômico.
A adição de sal, no início da experiência, proporcionou ao DNA um ambiente favorável. O sal contribui com íons positivos Na+ que neutralizam a carga negativa do DNA. Nessa forma, O DNA precipita na solução aquosa.
O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogênia (duas fases), em ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada.
O DNA não se dissolve no álcool, na concentração e na temperatura que se usou neste experimento. Pelo fato do DNA ser menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares, ele se localiza na interface da fase alcoólica e aquosa.
Dica
1. Você pode reforçar o saco zip loc colocando um dentro do outro para não rasga-lo com facilidade;
2. A objetiva que se consegue visualizar a estrutura do DNA ao microscópio é a de 40 vezes.
