Extraindo o DNA de uma cebola
BIOLOGIA
EXTRAÇÃO DE DNA DA CEBOLA.
Objetivo
Extrair o DNA da cebola que é visualizado a olho nu e mostrar o seu aspecto.
Descrição
As membranas, celular e nuclear são compostas principalmente por lípidos. As proteínas encontram-se aprisionadas na bicamada lipídica.Os organitos celulares são compostos por proteínas, ácidos nucleicos ( DNA e RNA ), envolvidos por uma membrana.As paredes celulares das células vegetais são compostas essencialmente por polissacarídeos.As pequenas estruturas celulares são compostas por substâncias com diferentes propriedades químicas, pelo que os procedimentos experimentais devem ser definidos de modo a separar um determinado constituinte celular das restantes partes, sem causar muitos danos.Cerca de 99% do DNA encontra-se no núcleo da célula. A extração de DNA de células eucarióticas foi efetuada em três etapas:
a) ruptura das células para liberação do núcleo;
b) desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos, DNA e proteínas; c) separação do DNA dos demais componentes celulares.
Material
Uma cebola grande;
Faca de cozinha;
Proveta de 100mL;
Béquer de 200mL;
Banho-maria(+-60°C);
Água filtrada;
Sal de cozinha(NaCl);
Detergente líquido para louça;
Álcool etílico 95%(gelado);
Bastão de vidro ou madeira;
Peneira;
Gelo moído.
Procedimento
– Pique a cebola em pedaços bem pequenos;
– Coloque na proveta 2g de sal (cerca de uma colher de chá), 10mL de detergente e complete o volume para 100mL com água; mexe-se bem até a total dissolução;
Coloque a cebola picada juntamente com a solução de detergente e sal; leve ao banho-maria por 15 minutos;
Retire a mistura do banho-maria e resfrie-a rapidamente, colocando o béquer num vasilhame com o gelo picado durante 15 minutos mexendo com bastão durante o resfriamento;
Filtre a mistura com a peneira, recolhendo o filtrado em um béquer limpo;
Adicione ao filtrado cerca de 100mL de álcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente pela borda. Irá formar duas fases, a superior, alcoólica, e a inferior, a aquosa;
Mergulhe o bastão no copo e , com movimentos circulares, puxe-o para cima. Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.
Análise
O bulbo da cebola foi usado por apresentar células grandes, que se rompem quando a cebola é picada. Além do DNA ser mais ampliado.
O detergente dissolve as membranas lipídicas além de desintegrar os núcleos e os cromossomos das células da cebola, liberando o DNA.Com a ruptura das membranas, o conteúdo celular, incluindo DNA e proteínas, soltam-se e dispersam- se na solução. Um dos componentes do detergente, o lalril sulfato de sódio, desnatura as proteínas, separando-as do DNA cromossômico.
A adição de sal , no início da experiência, proporcionou ao DNA um ambiente favorável. O sal contribui com íons positivos Na+ que neutralizam a carga negativa do DNA. Nessa forma, O DNA precipita na solução aquosa.
O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogênia (duas fases), em ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada.
O DNA não se dissolve no álcool, na concentração e na temperatura que se usou neste experimento. Pelo fato do DNA ser menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares, ele se localiza na interface da fase alcoólica e aquosa.
